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CRISPR-CAS基因组编辑技术的最新进展在提高效率方面产生了重要的作用,以产生基因修饰的动物模型。在这项研究中,我们结合了四种非常有前途的方法,以提出高效的管道来产生敲击小鼠和大鼠模型。四种组合方法包括:AAV介导的DNA递送,单链DNA供体模板,2细胞胚胎修饰和CRISPR-CAS核糖核蛋白(RNP)电穿孔。使用这种新的组合方法,我们能够成功地产生含有CRE或FLP重组酶序列的成功靶向敲击大鼠模型,具有超过90%的敲击效率。此外,我们能够产生一个含有CRE重组酶靶向插入的敲门小鼠模型,其效率超过50%,将效率直接比较与其他常用方法。我们使用2细胞胚胎CRISPR-CAS9 RNP电穿孔技术进行了修改的AAV介导的DNA递送,已证明对生成敲入小鼠和敲门大鼠模型非常有效。

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