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恶性癌细胞会不受控制地增殖,并可能转移到远处器官。转移的一个关键步骤是癌细胞在扩散到远处器官之前侵入邻近组织的能力。因此,了解侵袭机制可能有助于发现新的可用药物靶点以防止转移。在本项目中,使用 CRISPR 敲除筛选体外研究了人类黑色素瘤细胞的侵袭性。为此,评估了三个汇集的 CRISPR 文库,然后选择其中一个进行筛选。在验证了所选表观遗传敲除文库的 gRNA 表示后,生成了一个慢病毒文库以转导 A375 黑色素瘤细胞。然后使用 Matrigel 侵袭室通过优化的侵袭试验检查突变黑色素瘤细胞的侵袭性。将转导的黑色素瘤细胞接种到上室中,并使其通过 Matrigel 迁移到具有更高化学引诱剂浓度的下室。随后分别收集上室和下室细胞,分离基因组DNA,通过PCR扩增制备测序文库,并用Illumina新一代测序技术进行测序。本报告不包含CRISPR筛选的测序数据。

CRISPR 筛选可识别调控黑色素瘤细胞侵袭性的基因

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