由于蛋白质的氨基酸组成不同,每种蛋白质都有其独特的滴定曲线。分离蛋白质的潜力取决于净电荷的差异,差异越大,通过离子交换将它们分开的机会增加。这如图5。3蛋白质橙色,绿色和蓝色都有独特的滴定曲线。如果我们运行了阳离子IEX色谱(带负电荷的树脂),则使用低盐缓冲液与虚线紫色线指示的pH来平衡和加载色谱柱。所有三种蛋白质都将带有正电荷并与树脂结合。在梯度洗脱过程(盐浓度升高)期间,绿色蛋白在梯度早期首先从色谱柱中相互作用(即低盐浓度用于洗脱),因为它的总正电荷最低。蓝色蛋白质的相互作用最强烈,并从色谱柱中恢复最后一次,因为它具有最高的总体电荷。如果我们使用相同的条件运行了阴离子IEX色谱(带正电荷的树脂),只是改变了缓冲液的pH值,如虚线的红线所示,橙色和蓝色蛋白质会带有正电荷,并在载荷过程中被树脂和在载荷过程中通过圆柱直接流动,而携带负电荷的绿色蛋白质会在盐梯度期间结合和ELETUTE。在考虑过程中的pH值时,避免PI是正常的,因为没有总体净电荷可以使蛋白质沉淀。更改pH是控制离子交换中选择性的极其强大的方法。
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