摘要:RNA编程的CRISPR效应蛋白CAS12A已成为基因编辑和分子诊断的强大工具。但是,需要其他生物工程策略来控制CAS12A活动。在这里,我们表明,可以使用toehold开关DNA发夹,并在环路中呈现一个合理设计的锁定的原始探针相邻基序(PAM),可用于控制CAS12A,以响应分子输入。通过链位移反应从发夹中重新配置Toehold开关DNA从发夹到双链体构象,这提供了一种有效的手段来调节PAM的可及性,从而控制了Cas12a的结合和裂解活性。通过这种方法,我们通过利用基于接近度的链位移反应来响应目标结合来展示触发下游CAS12A活性的潜力。通过利用Cas12a的反式分解活性作为信号转导方法,我们证明了我们的传感应用方法的多功能性。我们的系统可以快速地检测具有高灵敏度和特异性的IgG抗体和小分子。除了生物分析应用外,可开关的PAM设计的脚趾开关还可以作为可编程工具,能够调节基于CAS12A的靶向和DNA处理,以响应分子输入,并且对广泛的生物技术应用持希望。
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