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然而，尽管 CRISPR/Cas 技术具有革命性的地位，但它也存在明显的局限性和缺陷。CRISPR/Cas 最重要的限制是可能出现脱靶编辑，即 CRISPR/Cas 在非预期的位置切割 DNA。这种脱靶（OT）编辑会扭曲功能实验的解释，引入噪音和变异性，从而降低实验结果和功能性结论的可靠性。重要的是，OT 活性在 CRISPR 的治疗应用中尤其危险，在这种情况下，即使非常低频率的 OT 编辑也可能产生极其灾难性的后果 2,3 。为了应对这一挑战，该领域的许多努力都集中在改进 guideRNA（gRNA）设计以确保靶标特异性 4 和设计具有更高保真度的 Cas 变体 5 。同时，测量 OT 效应的方法，例如 GUIDE-seq 6 、CIRCLE-seq 7 和 SITE-seq 8 ，也有助于提高我们量化和合理化 OT 编辑的能力。此外，预测 OT 的能力对于该领域来说越来越重要，从而导致开发出各种用于预测 OT 位点的计算方法。
CHOPOFF：符号比对可实现快速灵敏的 CRISPR 脱靶检测
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