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英国，伦敦大学学院 GOS 2 号儿童健康研究所，英国伦敦基因疗法使用自体离体基因修饰的 CD34 + 造血干细胞 (HSC) 移植作为治疗一系列单基因疾病的方法，现在已通过多项临床研究和监管部门的批准，因其变革潜力而得到认可。尽管基因疗法的商业化取得了重大进展，但患者可及性的主要障碍是目前制造 GMP 级慢病毒 (LV) 载体的能力有限，以及生产基因和细胞疗法所产生的相应高昂成本。此外，还需要为成年患者（例如患有 X 连锁慢性肉芽肿病 (X-CGD) 的患者）制造更多基因修饰的 HSC，以及用于患者群体较大的适应症。因此，降低载体需求和商品成本是基因疗法商业化的关键挑战。转导增强剂的应用使得可以使用更少量的 LV 载体来实现相同的基因修饰细胞产量。几种增强剂化合物已常规应用于临床基因和细胞治疗制造，以改善病毒在不同细胞水平上的转导过程，例如病毒附着、载体进入和基因组整合。为了开发一种优化的 LV 转导 HSC 方案，我们筛选了 20 多种市售和新型候选化合物，以增强活性，单独使用或组合使用以针对不同的病毒转导途径。我们全面调查了这些增强剂可实现的转导效率 (TE) 和载体拷贝数 (VCN) 的改善情况，使用临床级治疗性 LV 载体，通过缩小高通量和临床规模的转导过程进行 HSC 基因治疗药物产品制造。然后评估了最有效的增强剂组合与其他已知转导培养过程修改的兼容性，以开发一种优化的 HSC 转导方案。对增强剂处理的 HSC 进行了广泛的体外和体内表征，包括 RNAseq 转录分析和小鼠竞争性植入研究。我们在此描述了 J-Boost，它是一类新型转导增强剂（二嵌段共聚物，PCT/US20/56123）中的代表性化合物，可促进病毒进入。当与硫酸鱼精蛋白 (PS) 和高密度培养物结合使用时，J-Boost 可使 VCN 增加约 9 倍，TE 增加约 4 倍，使 HSC 转导至 LV 载体减少 50-70%
体外修饰细胞疗法的进展
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