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识别靶DNA,然后利用内切酶Cas9蛋白在靶基因位点引入位点特异性双链断裂(DSB)。3已经通过使用CRISPR/Cas9 DNA(可以编码Cas9的质粒DNA和病毒基因组)、mRNA或蛋白质获得了成功的基因编辑活动。4,5通常,直接递送Cas9/sgRNA RNP复合物是近年来最广泛的方法,因为它具有速度快、基因编辑效率高、离靶效应低和免疫反应低等优点。6然而,尽管基于RNP的治疗方法具有诸多优势,但仍存在一些挑战。目前,物理方法(电穿孔、显微注射等)和病毒载体(腺病毒、腺相关病毒等)仍然是主要的递送策略。 7,8 尽管已报道了一些非病毒纳米载体(如 DNA 纳米线、9 阳离子脂质或聚合物 10 和黑磷 11)用于 RNP 递送,但它们仍然难以在体外和体内实现有效的基因编辑。一般来说,有三个递送问题需要考虑。首先,CRISPR/Cas9 RNP 尺寸较大,表面带电较多,难以浓缩成小尺寸或封装。12

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