突触体传统上是从啮齿动物或死后人类脑组织中富集的,但啮齿动物模型缺乏人类特有的突触特征,而死后组织中突触体的功能受到死后间隔的限制,并且通常仅显示疾病终点。此外,由于道德问题和可用性问题,只有少数研究针对人类样本。然而,神经类器官 (NO) 已成为分离完整和活的人类神经末梢以研究人类特有的突触传递方面的可能新来源。此外,突触体的富集通常使用密度梯度离心进行,这需要大量的起始材料。在本研究中,我们开发了一种应用差速离心方案从人类 NO 中富集突触结构的方法。然后,我们使用基于质谱的定量蛋白质组学来记录突触和生长锥特异性蛋白的富集,并在 KCl 刺激下进行定量磷酸化蛋白质组学来证明衍生突触结构的活力和生理功能。
主要关键词