上皮到间质转变(EMT)是一个细胞分化过程,上皮细胞会失去许多上皮特征,同时获得间充质,成纤维细胞样性质,从而导致细胞 - 细胞接触降低和运动性降低。虽然被认为是正常胚胎发育所需的基本过程,但EMT被认为是由恶性上皮肿瘤采用的,以促进其转移扩散。刺激EMT的中心是生长因子配体的TGF-β超家族,它主要通过TGF-β/SMAD信号通路引起受体介导的反应。在这些途径中,受体介导的SMAD(R-SMAD)蛋白是主要下游效应子分子,其活性通过受体介导的磷酸化调节。配体诱导的受体活化的大小和持续时间影响SMAD磷酸化的水平,进而影响下游细胞反应的大小。本研究描述了在TGF-β诱导的EMT的细胞模型中定量评估对TGF-β/SMAD途径激活的生化和细胞反应的高通量方法。使用二维和三维(球形)模型,在不同水平的生物学复杂性(生化,细胞和多细胞)中检查了途径激活的效果。总的来说,这些方法能够全面评估TGF-β/SMAD途径激活,该途径可与高通量分析平台相提并论。
主要关键词