CriMCE:一种通过 CRISPR 介导的盒式交换引入和分离精确无标记编辑的方法 Ioanna Morianou 1、Andrea Crisanti 1,2、Tony Nolan 3、Andrew M. Hammond 1,4,5 * * 通讯作者 作者隶属关系: 1 伦敦帝国理工学院生命科学系,伦敦,英国 2 帕多瓦大学分子医学系,帕多瓦,意大利 3 利物浦热带医学院媒介生物学系,利物浦,英国 4 约翰霍普金斯大学彭博公共卫生学院分子微生物学和免疫学系,巴尔的摩,马里兰州,美国 5 Biocentis,Ltd.,伦敦,英国 标题:基于 CRISPR 的无标记编辑方法 关键词:CRISPR;基因组编辑;盒式交换;无标记编辑;基因驱动。摘要 在昆虫基因组中引入小的、未标记的编辑对于研究重要生物学特性(例如抗杀虫剂和遗传控制策略)的分子基础至关重要。CRISPR 基因组工程的进步使这成为可能,但由于编辑率低和缺乏可选择的标记,大多数实验室都难以做到这一点。为了促进精确的无标记编辑的生成和分离,我们开发了一种两步方法,该方法基于 CRISPR 介导的盒式交换 (CriMCE),将标记的占位符用于感兴趣的变体。与以前的方法相比,此策略可用于引入更广泛的潜在编辑,同时整合工作流程。我们通过将三种 SNP 变体设计到冈比亚按蚊的基因组中,提出了原理证明,证明 CriMCE 是一种强大的工具,其编辑率比同源定向修复或主要编辑高 5-41 倍。
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