图 1 单细胞测序分析的一般工作流程。(a)通过分离原生质体(小绿圈)将组织或器官解离成单个细胞;(b)将原生质体装入封装单个原生质体(小绿圈)的微流体系统中,其中试剂用于标记具有不同条形码(较大的多色圆圈)的转录本,所述条形码可识别转录本来源的细胞,也可以通过此过程添加其他条形码,例如 UMI;(c)然后汇集带条形码的转录本并使用短读技术进行测序;(d)然后处理测序读取以根据文库制备期间添加的条形码序列将每个转录本分配给来源细胞; (e) 所有细胞的转录组都经过降维(例如 tSNE 或 UMAP),其中具有相似转录组谱的细胞将在二维空间中绘制得更紧密,而具有不太相似转录组的细胞将绘制得更远,并且可以通过算法识别具有相似转录组的细胞簇。在此示例中,图上的每个点代表一个细胞,点的颜色代表该细胞被分配到的簇。(f)细胞簇可以根据已知标记基因的丰度或与已建立细胞类型的转录组的整体相似性被表征为已知细胞类型;如果没有已知标记与观察到的转录组谱相匹配,细胞簇也可以被描述为未知的或新的。在此示例中,重建组织中的细胞被着色以反映图 (e) 中识别的假设转录组簇