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竹节虫 Medauroidea extradentata 的孤雌生殖生命周期为转基因品系的产生提供了独特的优势,因为原则上在第一代就可以实现同源且稳定的转基因品系。然而,到目前为止,用于操纵其基因的遗传工具尚未开发出来。在这里,我们成功地实施了 CRISPR/Cas9 技术来修改竹节虫 Medauroidea extradentata 的基因组。作为概念验证,我们针对参与眼色素沉着的 ommochrome 途径的两个基因(朱砂和白色,分别为第二和第一外显子)以产生敲除 (KO) 突变体。产卵后 24 小时内进行微注射,重点关注单细胞(和单倍体)发育阶段。产生的 KO 导致朱砂和白色的眼睛和角质层颜色表型不同。纯合朱砂突变体的眼睛和表皮呈现淡色色素沉着,而纯合白色 KO 导致发育中的胚胎完全无色素表型。总之,我们表明 CRISPR/Cas9 可以成功应用于 M. extradentata 的基因组,从而产生表型不同且可存活的动物。现在可以使用这种遗传工具箱,利用孤雌生殖非模式生物创建稳定的转基因品系。

孤雌生殖竹节虫的开创性基因组编辑

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