CRISPR / CAS系统广泛用于基因组编辑。然而,强大的和有针对性的DNA段插入仍然是一个挑战。在这里,我们提出了一个融合核酸酶(CAS9-N57),以通过融合的DNA结合结构域增强位点DNA的整合,以使DNA片段将DNA段带到Cas9 / Sgrna络合物。插入是单向和特定的,并且长度长达12 kb的DNA片段已成功整合。作为对系统的测试,CAS9-N57在人类T细胞中插入CD19特异性嵌合抗基因受体(CD19卡)盒(CD19-CAR)盒中的AAVS1基因座,并通过同时发生的肌肉凝聚和肌肉凝聚在小鼠中,并诱导肌内胆管癌的位置,并促进了inscogen2的inscogen gecogenion inscogenion inscogenion inscogenion ogenition,破坏TRP53和PTEN。更重要的是,基于ASCPF1(ASCAS12A)和CJCAS9的Nuclease-N57融合蛋白表现出相似的活性。这些发现表明,CRISPR-核酸酶-N57蛋白融合是靶向DNA插入的强大工具,并且对基因治疗应用非常有用。
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