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快速增长的细菌颤音纳特里格斯最近随着一种新型的底盘生物在广泛的项目中引起了人们的关注。为了充分利用这种引人入胜的细菌的潜力，方便且高效的基因组编辑方法是必不可少的，以创建针对特定应用的新型菌株。V. Natriegens能够通过同源重组来捕获自由DNA，并将其纳入其基因组。这个过程称为自然转化，被驯服用于基因组编辑。它显示出高效率，并能够介导多个DNA片段的摄取，从而允许多个同时编辑。在这里，我们描述了NT-Crispr，这是自然转化与CRISPR/CAS9反选择的组合。在两个时间上不同的步骤中，我们首先通过自然转化进行了基因组编辑，其次，诱导CRISPR/CAS9，靶向野生型序列，导致未编辑的细胞死亡。通过高效的细胞杀伤，效率高达99.999％，抗生素耐药性标记的整合变得可易于配置，因此具有单基准精确度的无疤面和无标记的编辑。我们使用NT-Crispr进行了删除，集成和单基碱修饰，其编辑效率高达100％，并进一步证明了其对同时缺失多个染色体区域的适用性。最后，我们证明了近乎无PAM的CAS9变体SPG Cas9与NT-Crispr兼容，从而大大拓宽了目标频谱。
nt-crispr
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