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从I级丝状噬菌体FD的DNA中切除带有主要外套蛋白基因(基因VIII)的限制片段,该片段感染了大肠杆菌。将此片段克隆到表达质粒PKK223-3中,在该质粒PKK223-3下,它属于TAC启动子的控制,产生质粒PKF8P。噬菌体FD基因VIII类似地克隆到质粒pembl9 +中,使其能够受到位置定向的诱变。通过这种方式,位于48位的带正电荷的赖氨酸残基是该蛋白质C末端附近的四个带电的残基之一,变成了带负电荷的谷氨酸残基。将突变的FD基因VIII从Pembl质粒克隆回表达质粒PKK223-3,从而产生质粒PKE48。在诱导剂的存在下,在大肠杆菌TG 1细胞中强烈表达野生型和突变的外套蛋白基因,分别用质粒PKF8P和PKE48转化,以及产物procoat Procoat Procoat Proceat Procein procoat Procein procoat Procein procoat Procein procein procein procein roceins roceation costance and Insertion to coli coli coli coli nistrane noteMbrane insbrane insbrane nistrane。在C末端区域的侧链上仅2个净正电荷在病毒组装过程的初始阶段显然足够。然而,当对大肠杆菌的非抑制剂菌株进行测试时,突变的外套蛋白无法封装噬菌体R252的DNA,该噬菌体R252是一种含有琥珀色突变的FD噬菌体。另一方面,可以产生细长的杂化噬菌体颗粒,其衣壳中包含野生型(K48)和突变体(E48)亚基的混合物。这表明组装中的缺陷可能发生在病毒组装中的启动而不是伸长步骤处。还发现,在外套蛋白的C末端区域中除去或反转了在该位置的正电荷的其他突变也导致相应更长的噬菌体颗粒的产生。总的来说,这些结果表明Capsid中DNA和外套蛋白之间的直接静电相互作用,并支持DNA和外套蛋白亚基之间的非特异性结合模型,并具有在组装过程中可以变化的stoicheiiemementry。

fflamentos噬菌体组装中DNA和外套蛋白之间的可变静电相互作用

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