无细胞的系统可以通过绕过与使用活细胞使用相关的麻烦需求来加快生物制造过程的设计和实施。尤其是，缺乏生存目标和无细胞反应的开放性质提供了工程方法，可以有目的的代谢通量方向。与基于细胞的对应物相比，使用基于裂解物的系统生产所需的小分子可能会导致竞争性滴度和生产力。但是，内源裂解物代谢中的路径串扰可以通过将碳流从所需的产物中转移而损害转化率。在这里，“基础 - 灌注 - 刷子”的常规代谢工程概念适应了一种无细胞的方法，可有效地将碳流从葡萄糖和内源性乙醇合成中引导。该方法很容易适应，相对较快，可以操纵细胞提取物中的中央代谢。在实施这种方法时，首先优化了块策略，从而使选择性酶从裂解物中去除到消除副产物形成活性的点，同时通过目标途径引导通量。这与无细胞的代谢工程方法相辅相成，这些方法可以操纵裂解物蛋白质组和反应环境，从而穿过瓶颈并向乙醇拉动通量。纳入这些块，推动和拉动策略的方法最大程度地提高了葡萄糖到乙醇的转化率，而大肠杆菌裂解物的乙醇裂解液则具有低乙醇的潜力。显示出10倍的提高百分比。据我们所知，这是成功重新布线溶液碳通量而没有源应变优化的第一份报告，并将消耗的输入底物完全转化为基于裂解物的无单元格系统中所需的输出产品。