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对于任何成像技术，要充分利用活细胞显微镜的潜力，需要专业知识来优化图像采集条件，使其具有最小的侵入性。例如，大多数组织和细胞在其正常生命周期中从未暴露在光线下，众所周知，紫外线 (UV) 会损害 DNA（Sinha 和 Häder 2002），聚焦红外 (IR) 光会导致局部加热（Davaji、Richie 等人 2019），荧光激发会引起（光）毒性（Magidson 和 Khodjakov 2013）。在光毒性的情况下，负责的是激发态（通常是三重态）的荧光蛋白或染料与细胞成分中的分子氧或周围分子之间的反应产生的自由基物质（Tosheva、Yuan 等人 2020）。因此，对于活细胞成像，最好通过减少激发光量、优化光路效率和使用最大化光子收集的探测器来最大限度地减少此类物质的产生。此外，设置为特定样本的典型生理水平的缺氧环境对于保持样本健康非常有益。
跨尺度和时间的实时成像
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