开发活体成像技术以提供染色质在活细胞中如何组织的信息对于解释生物过程的调节至关重要。在这里,我们展示了基于 CRISPR/Cas9 的活体成像技术的改进。在这种方法中,sgRNA 支架与 RNA 适体融合,包括 MS2 和 PP7。当死 Cas9 (dCas9) 与嵌合 sgRNA 共表达时,标记 MS2 和 PP7 适体的荧光外壳蛋白 (tdMCP-FP 和 tdPCP-FP) 被招募到目标序列中。与之前使用 dCas9:GFP 的工作相比,我们表明,使用基于适体的 CRISPR 成像构建体,瞬时转化的本氏烟的端粒标记质量得到了改善。标记受适体拷贝数的影响,受启动子类型的影响较小。相同的结构不适用于稳定转化植物和根中的重复标记。RNP 复合物与其靶 DNA 的持续相互作用可能会干扰细胞过程。
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