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使用CRISPR/CAS9系统进行基因编辑是一种非常有效的方法,用于在永生细胞系的基因组DNA中产生突变。此过程从一个直接的克隆步骤开始,以生成编码CAS9酶的单个质粒以及合成指导RNA(SGRNA),该质子(SGRNA)被选为靶向基因组中的特定位点。该质粒单独将其转染到细胞中,以通过非同源末端连接途径在所需的基因座上产生随机的插入缺失等位基因(“ indels”),或与同源性的有向修复模板寡核核苷酸一起产生特定点突变。在这里,我们描述了在IMCD3和HEK293细胞中执行基因编辑的程序,并随后分离带有感兴趣的突变的克隆细胞系。

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