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摘要：将定制设计的 DNA 序列插入哺乳动物基因组在合成生物学中起着至关重要的作用。特别是，以位点特异性方式引入外来 DNA 的能力比随机 DNA 整合具有许多优势。在这篇综述中，我们重点介绍了两种机制不同的系统，它们已被广泛用于哺乳动物细胞中的靶向 DNA 插入，即 CRISPR/Cas9 系统和位点特异性重组酶。CRISPR/Cas9 系统凭借其高度可编程性和易用性彻底改变了基因组工程领域。然而，由于其依赖线性化的 DNA 供体和内源性细胞途径来修复诱导的双链断裂，CRISPR/Cas9 介导的 DNA 插入仍然面临一些限制，例如插入片段小，以及通过易出错的修复途径产生不理想的编辑结果。相比之下，位点特异性重组酶，特别是丝氨酸整合酶，表现出大容量能力，并且不依赖细胞修复途径进行 DNA 整合。在这里，我们首先描述了在提高基于 CRISPR/Cas9 的 DNA 插入方法的整体效率方面的最新进展。此外，我们重点介绍了位点特异性重组酶在靶向 DNA 整合方面相对于 CRISPR/Cas9 的优势，特别关注了可编程重组酶的最新发展。最后，我们讨论了蛋白质工程对于进一步扩展哺乳动物细胞中靶向 DNA 插入的当前工具包的重要性。关键词：CRISPR/Cas9、位点特异性重组酶、靶向 DNA 整合、蛋白质工程、可编程整合酶
通过靶向 DNA 整合拓展哺乳动物基因组工程的潜力
主要关键词
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