(A) 使用 sgRNA 文库针对所有 UPS 和关键相互作用组基因进行 CRISPRko 筛选的示意图。与表达经过验证的 PROTEINi® 的细胞共表达,并收集低和高 GFP 群体以识别诱导 GFP 降解的功能依赖性。 (B) 对于我们的一种 GFP 降解诱导 PROTEINi®,CRISPR 筛选反卷积揭示了负责降解剂功能的单个关键 E3。 (C) 通过突变分析确定结构活性关系 (SAR),以识别关键残基并建立结合模型。 (D) 这允许模拟 E3 连接酶结合并从肽 SAR 中从头识别经过计算机验证的 PROTEINi® 结合口袋,以启动我们的小分子开发流程。