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通过基因敲击将有用的特征引入牲畜育种计划已被证明具有挑战性。通常，在细胞系中进行了靶向插入，然后进行体细胞核转移克隆，这可能是效率低下的。一种替代方法是引入基因组编辑试剂和同源重组（HR）供体模板中的胚胎，以触发同源性定向修复（HDR）。然而，HR途径主要仅限于主动分裂细胞（S/G2相），其在合子中引入大型DNA序列的效率很低。同源介导的末端连接（HMEJ）方法已被证明可以提高非分散细胞的敲击效率，并在直接注射胚胎后利用HDR。将GRNA/CAS9核糖核蛋白复合蛋白复合物与传统的HR供体模板或牛zygotes中的HMEJ模板相结合时，将1.8 kb基因的敲门效率对比。与HR模板相比，HMEJ模板的基因敲入速率明显更高（37.0％和13.8％； P <0.05）。此外，超过三分之一的敲入胚胎（36.9％）是非摩萨剂。这种方法将促进牛基因组特定位置的基因构建体的一步引入，并有助于下一代精英牛。
利用牛胚胎靶向基因敲入的内源性修复机制
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