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用于调整内源基因表达的抽象工具是确定各种细胞表型的遗传基础的关键。尽管在弓形虫中可以使用合成的可调节性,但基因表达的靶向和组合下调的可扩展方法(如RNA干扰)尚未得到发展。为了研究CRISPR介导的转录调控的可行性,我们研究了来自甲状腺链球菌和嗜热链球菌的两个催化无活性Cas9(DCAS9)直系同源物的功能。在添加靶向启动子的单个指定RNA(SGRNA)和表面抗原基因SAG1的5 9个未翻译区域(UTR)后,我们对靶基因的蛋白质刺激蛋白质的变化通过流量细胞仪的蛋白质刺激变化,用于转录报告基因和immu-immu-nosu-nosu-noce。我们发现DCAS9直系同源物产生了一系列靶基因表达水平,并且抑制程度持久且稳定地遗传。因此,化脓性链球菌和嗜热链球菌DCAS9可以有效地产生弓形虫中的基因表达水平。两个DCAS9的独特的SGRNA支架要求允许通过转录调制,基于显微镜的研究标记或其他基于DCAS9的方法同时检查两个不同的基因座。利用新近获得的基因组转录起始站点数据,这些工具将有助于开发弓形虫的新功能筛查方法。

CRISPR介导的转录抑制作用弓形虫Gondii

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