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图1创建合成cAMP响应元件结合蛋白（CREB）响应启动子。（a）腺苷信号传导的描述。腺苷（红色球）结合腺苷受体A2AR/A2BR，该腺苷受体动员相关的G蛋白（绿色）激活腺苷酸环化酶（橙色受体），并将ATP转化为3'5'- 5'-循环腺苷单磷酸腺苷（Camp）。另外，福斯科蛋白（橙色球）可以直接激活腺苷循环酶。CAMP结合蛋白激酶A（PKA）与磷酸化的CREB，该CREB结合了Plindromic DNA基序“ TGACGTCA”，激活了基因表达。（b）启动子设计和筛选示意图。cAMP响应元件基序（CRE，突出显示的黄色）被克隆在3倍重复中，两侧是鸟嘌呤“ G”（带下划线），六个散布的填充核苷酸（N）。3x Cres（灰色正方形）放在核心启动子（蓝色箭头）上游的1-6个重复中。用高斯荧光素酶（GLUC）或绿色荧光蛋白（EGFP）定量启动子活性。（c，d）HEK293T细胞在96个井板中用指示的构建体（x轴）反向转染。转染后48小时，用车辆（DMSO，浅蓝色条）或20μm福斯科林（FSK，深蓝色条）将细胞介质更改为培养基。八个小时后，对培养基进行了采样并测试了GLUC活性（RLU）。条表示n = 3实验重复的平均值，误差线代表标准误差（SEM）。**通过方差分析（ANOVA）Tukey检验，与所有其他样本相比，表示P <0.01。（E，F）流式细胞仪启动子诱导。HEK293T细胞用96个井板中的指定构建体（x轴）反向转染。转染后48小时，细胞培养基被更改为未处理的培养基（浅蓝色条），或补充了0.750 m m m腺苷（ADO，深蓝色条）的培养基。八个小时后，将细胞胰蛋白酶胰蛋白酶进行胰蛋白酶，并将其重悬于FACS缓冲液中以进行流式细胞仪。y轴表示正向散射（FSC）单元的EGFP中位荧光强度。条代表n = 3实验重复的平均值，误差线代表SEM。（g）启动子对腺苷的剂量反应性。HEK293T细胞在96个井板上反向转染，并在传说中指示的构造，然后培养48小时。然后更改培养基以添加不同的腺苷浓度，在8小时后进行采样，并测试了GLUC活性（RLU）。**通过12倍-CRE_YB的ANOVA TUKEY测试代表P <0.01，与1 m m的所有其他样品相比。每个点表示n = 3实验重复的平均值，误差线为SEM。
癌细胞国际诱导基因表达
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