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摘要：来自自然来源的热耐酵母在行业中引起了很多关注，因为它们稳健并且可以忍受几种压力。将天然酵母菌菌株用作生产异源蛋白质的宿主，选择转化的细胞并维持重组质粒需要遗传标记。酿酒酵母菌株C3253从泰国葡萄中分离出来的酵母菌菌株C3253先前被描述为耐热酵母，可以耐受多重应力。这项研究旨在通过CRISPR/CAS9技术构建URA 3的营养突变体，然后可以通过酵母质粒和URA 3可选标记来转化。ura 3的酵母菌菌株的基因通过插入含有含量1启动子的Cas9基因的质粒来拆除，这是由SNR 52启动子控制的RNA 52启动子CRISPR/CAS9的指南RNA表达盒，KAN MX4的特定目标位点，KAN MX4可选择的标记物，可选择的标记和双链寡核油核纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维纤维修复的修复温度（Donor）（Donor）。从观察到各种选择性培养基中的尿中需要菌落，并通过在目标区域进行DNA测序确认，结果表明，天然酵母菌菌株中的URA 3基因被完全淘汰。突变克隆保留了多应力耐受性的特征，即热，氧化，渗透，乙醇和细胞壁应力。这项研究表明，CRISPR/CAS9技术可有效地用于自然酵母菌菌株的敲除基因。
在耐热天然酵母中的URA3基因破坏...
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